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Gélose R2A

Cet article est une ébauche concernant la microbiologie.

La gélose R2A (ou gélose Reasoner's 2A) est un milieu de culture non sélectif et non différentiel utilisé en microbiologie environnementale pour l'isolement et la numération des micro-organismes dans les eaux[1]. Il est référencé par la DSMZ sous le numéro 830[2] et par l'ATCC sous le numéro 2258[3]. Décrit en 1985 par D.J. Reasoner et E.E. Geldreich, il vise à améliorer les performances du dénombrement standard dans les eaux oligotrophes telles que les eaux potables, en augmentant le taux de récupération des micro-organismes non cultivables sur la gélose PCA auparavant recommandée[4]. Ces améliorations sont rapportées par les auteurs à des conditions de culture plus proches des conditions naturelles dans les eaux étudiées, à savoir une concentration de nutriments plus faible, ce qui évite l'envahissement des cultures par les espèces à croissance rapide, mais aussi une incubation à plus basse température.

Il fait partie des milieux recommandés aux USA pour l'analyse des eaux par des structures de santé publique telles que l'APHA (en), l'AWWA (en) et la WEF (en)[5]. Plusieurs travaux indiquent sa supériorité par rapport à la gélose PCA en termes de sensibilité, c'est-à-dire en nombre total de colonies isolées dans un échantillon donné[6],[7],[8].

Principe

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La base nutritive est diversifiée mais quantitativement pauvre puisqu'elle ne représente que 0,25% (m/m) de la masse finale du milieu. Sa composition s'inspire de milieux décrits en 1938 pour l'étude bactériologique d'eaux lacustres[9],[10]. L'extrait de levure est riche en nutriments et en vitamines, notamment du groupe B. Les apports protéiques sont assurés par de la protéose peptone, une peptone extraite du lait, et des casaminoacides qui sont un mélange d'acides aminés obtenu par hydrolyse acide de la caséine. Le milieu comporte de l'amidon comme glucide complexe et du glucose comme glucide simple (ose). Le magnésium apporté sous forme de sulfate est un nutriment bactérien d'usage général. Le pyruvate de sodium, additif protecteur facilitant la récupération des bactéries fragilisées[11],[12], est un ajout des auteurs non commenté dans la publication originale[4].

L'hydrogénophosphate de potassium sert de système tampon. L'agar est l'agent gélifiant.

Lecture

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Après incubation les colonies sont dénombrées manuellement ou à l'aide d'un logiciel de traitement d'image. La concentration de micro-organismes dans le substrat de départ, exprimée en UFC par millilitre, peut être déterminée par un simple calcul de proportionnalité (tenant compte d'un éventuel facteur de dilution) entre le nombre de colonies comptées et le volume d'échantillon mis en culture[5].

Composition

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Pour 1000 mL de milieu[4] :

  • extrait de levure : 0,5 g
  • protéose peptone : 0,5 g
  • casaminoacides : 0,5 g
  • amidon soluble : 0,5 g
  • glucose : 0,5 g
  • pyruvate de sodium : 0,3 g
  • hydrogénophosphate de potassium : 0,3 g
  • sulfate de magnésium, heptahydrate : 50 µg
  • agar : 15 g

Ajuster le pH à 7,2 (avant autoclavage, avant ajout d'agar).

Variantes

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La protéose peptone peut être remplacée par un mélange à parts égales de tryptone (en) et de peptone peptique de viande[13],[14],[15]. La quantité d'agar peut être abaissée à 12 g/L[1]

La gélose R3A est une variante d« R2A Agar »écrite par les auteurs pour le repiquage des colonies après leur isolement primaire sur gélose R2A. Les ingrédients sont identiques mais toutes les quantités sont doublées (gélose R2A 2×), sauf pour le pyruvate de sodium qui passe de 0,3 à 0,5 g/L et pour l'agar (même concentration)[4],[16],[17].

La gélose R2A modifiée est une variante décrite lors d'une étude portant sur l'isolement de bactéries dénitrifiantes capables de dégrader le toluène en conditions anaérobies[18], puis réutilisée par la même équipe pour décrire l'espèce Azoarcus tolulyticus[19]. Il s'agit d'une gélose R2A complétée d'un mélange complexe de sels minéraux[20],[21].

Préparation

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Aucun ingrédient n'étant thermosensible, il suffit de les dissoudre à chaud dans le volume correspondant d'eau distillée et de stériliser à l'autoclave (15 min à 121°C). Le mélange est ensuite réparti dans des contenants stériles.

Voir aussi

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Notes et références

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  1. 1 2 Corry JEL et al. « R2A Agar » in: Handbook of culture media for food and water microbiology. Cambridge, UK : 3rd edition, 2011, RSC Publishing, p. 890. (ISBN 978-1-84755-916-6)
  2. ↑ 830. R2A MEDIUM sur le site de la DSMZ, consulté le 03/11/2026.
  3. ↑ Résultat de la recherche du terme « 2258 » sur le site de l'ATCC, consulté le 03/11/2026.
  4. 1 2 3 4 Reasoner DJ & Geldreich EE « A new medium for the enumeration and subculture of bacteria from potable water » Appl Environ Microbiol. 1985;49(1):1-7. DOI 10.1128/aem.49.1.1-7.1985
  5. 1 2 Lipps WC et al.« 9215 Heterorophic Plate Count » in: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Washington, DC : 24th ed, 2023, APHA Press (ISBN 978-0-87553-299-8)
  6. ↑ Massa S et al. « Comparison of plate count agar and R2A medium for enumeration of heterotrophic bacteria in natural mineral water » World J Microbiol Biotechnol. 1998;14(5):727-730. DOI 10.1023/A:1008893627877
  7. ↑ Bugno A et al. « Enumeration of heterotrophic bacteria in water for dialysis: Comparison of the efficiency of reasoner'2 agar and plate count agar » Braz J Microbiol. 2010;41(1):15-18. DOI 10.1590/s1517-83822010000100003
  8. ↑ Cao X et al. « Comparing the effects of two culture methods to determine the total heterotrophic bacterial colony count in hospital purified water » J Epidemiol Glob Health. 2024;15;14(1):184–192. DOI 10.1007/s44197-023-00186-1
  9. ↑ Henrici AT « Studies of freshwater bacteria : IV. Seasonal fluctuations of lake bacteria in relation to plankton production » J Bacteriol. 1938;35(2):129-39. DOI 10.1128/jb.35.2.129-139.1938
  10. ↑ Stark WH & McCoy E « Distribution of bacteria in certain lakes of northern Wisconsin » Zbl Bakteriol Infektionskr Abt 2. 1938;98:201-209 (pas de DOI). Accès libre
  11. ↑ Baird-Parker AC « An improved diagnostic and selective medium for isolating coagulase positive Staphylococci » J Appl Bact. 1962;25(1):12-19. DOI 10.1111/j.1365-2672.1962.tb01113.x
  12. ↑ Imazaki I & Kobori Y « Improving the culturability of freshwater bacteria using FW70, a low-nutrient solid medium amended with sodium pyruvate » Can J Bacteriol. 2010;56(4):333-341. DOI 10.1139/W10-019
  13. ↑ « R2A Agar » in: Atlas RM. Handbook of media for environmental microbiology. Boca Raton : 2nd ed, 2005, CRC Press, Taylor & Francis Group, p. 474. (ISBN 9780849335600)
  14. ↑ « R2A Agar » in: Handbook of microbiological media. Washington, DC : ASM Press. Boca Raton : 4th ed, 2010, CRC Press, Taylor & Francis Group, p. 1472. (ISBN 978-1-4398-0408-7)
  15. ↑ « R2A Agar » in: Atlas RM & Snyder JW. Handbook of media for clinical and public health microbiology. Boca Raton : 2014, CRC Press, Taylor & Francis Group, p. 364. (ISBN 978-1-4665-8293-4)
  16. ↑ « R3A Agar » in: Atlas RM. Handbook of media for environmental microbiology. Boca Raton : 2nd ed, 2005, CRC Press, Taylor & Francis Group, p. 475. (ISBN 9780849335600)
  17. ↑ « R3A Agar » in: Handbook of microbiological media. Washington, DC : ASM Press. Boca Raton : 4th ed, 2010, CRC Press, Taylor & Francis Group, p. 1473. (ISBN 978-1-4398-0408-7)
  18. ↑ Fries MR et al. « Isolation, characterization, and distribution of denitrifying toluene degraders from a variety of habitats » Appl Environ Microbiol. 1994;60(8):2802-2810. DOI 10.1128/aem.60.8.2802-2810.1994
  19. ↑ Zhou J et al. « Phylogenetic analyses of a new group of denitrifiers capable of anaerobic growth on toluene and description of Azoarcus tolulyticus sp. nov. » Int J Syst Bacteriol. 1995;45(3):500-506. DOI https://10.1099/00207713-45-3-500
  20. ↑ « R2A Agar, Modified » in: Atlas RM. Handbook of media for environmental microbiology. Boca Raton : 2nd ed, 2005, CRC Press, Taylor & Francis Group, p. 474. (ISBN 9780849335600)
  21. ↑ « R2A Agar, Modified » in: Handbook of microbiological media. Washington, DC : ASM Press. Boca Raton : 4th ed, 2010, CRC Press, Taylor & Francis Group, p. 1473. (ISBN 978-1-4398-0408-7)
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